刘明广 张新红

（阜阳职业技术学院生化工程系，安徽 阜阳 236031）

摘  要：为开发利用一株大肥蘑菇，分别从碳源、氮源、无机盐、温度、水份和PH等方面研究了该株大肥蘑菇的生物学特性，结果表明：该株大肥蘑菇菌丝生长的最适碳源为麦芽糖、最适氮源为麸皮、最适无机盐为硫酸钙、最适培养基含水量为60%、最适温度为20℃、最适PH为6.5。

关键词：大肥蘑菇；菌丝；生物学特性

大肥蘑菇（Agaricus  bitorquis（Quél．）Sacc．）又名大肥菇，美味蘑菇，双环菇，双环蘑菇，大白蘑菇，属于担子菌纲（Basidiomycetes）伞菌目（Agaricales）蘑菇科（Agaricaceae）蘑菇属（Agaricus）^[1]。广泛存在于世界各地不同生境中^[2]。大肥蘑菇不仅味道鲜美，而且具有多种营养和保健功能，是一种极具开发潜力的食用菌。笔者研究了该株大肥蘑菇的菌丝生长特性，为人工驯化栽培提供理论依据。

1 材料与方法

1. 供试菌株和培养基

大肥蘑菇（ACCC50034），由中国农业微生物菌种保藏中心提供，该菌株源于澳大利亚。供试培养基：葡萄糖２0ｇ、蛋白胨2ｇ、磷酸二氢钾1.0ｇ、硫酸镁0.5ｇ、琼脂20ｇ、蒸馏水定容至1000ｍＬ，121.3℃灭菌20min，PH自然。将大肥蘑菇（ACCC50034）接种到含有供试培养基的培养皿，25℃恒温培养，待菌丝基本长满平板待用。

1. 大肥蘑菇菌丝显微观察

取大肥蘑菇菌落边缘的菌丝(用解剖刀取一块带有边缘菌落的边长为1cm方形培养基)，将带有菌丝的培养基平贴在载玻片中央,置于荧光倒置显微镜的载物台上进行显微观察并拍照。

1. 不同碳源对菌丝生长的影响

制备6种不同碳源培养基：4g碳源，4g琼脂，0.2g磷酸二氢钾，0.1g硫酸镁，0.4g蛋白胨，200mL纯净水；试验用碳源分别为葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、乳糖、麦芽糖和果糖。每组5个重复平板，在超净工作台上用直径为5毫米的无菌打孔器取大肥蘑菇菌落边缘菌丝接入不同碳源的平板中央，25℃恒温培养。分别于接种后11d、12d记录菌丝生长状况。

1. 不同氮源对菌丝生长的影响

制备6种不同氮源培养基：4g葡萄糖，0.4g酵母膏，4g琼脂，0.2g磷酸二氢钾，0.1g硫酸镁，200mL纯净水；每组添加氮源分别为1.2g酵母膏、0.6g蛋白胨、0.2g尿素、6g玉米粉、6g麸皮和0.5g硫酸铵。每组5个重复平板；接种方法同1.3，接种后于25℃恒温培养。分别于接种后11d、12d测量菌落直径, 记录菌丝生长状况。

1.5 不同无机盐对菌丝生长的影响

配制5种不同无机盐培养基：4g葡萄糖，0.4g酵母膏， 4g琼脂，200mL纯净水；每组添加无机盐分别为0.1g硫酸镁、0.2g磷酸二氢钾、0.1g硫酸钙、0.1g硫酸锌、0.1g硫酸亚铁。每组5个重复平板，接种方法同1.3，接种后于25℃恒温培养。分别于接种后10d、11d测量菌落直径,记录菌丝生长状况。

1.6 不同温度对菌丝生长的影响

设置7个温度梯度：5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃和35℃，每一梯度设置5个重复平板，接种方法同1.3，接种后分别放入上述温度的生化培养箱进行恒温培养，培养到11d、12d记录菌丝生长状况。

1.7 不同含水量对菌丝生长的影响

培养基配方为：干牛粪50%、玉米芯40%、棉籽壳7.45%、麦麸2.5%、硫酸钙0.05%；将培养基含水量调配成分别45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%和80%，然后装入21×200mm的试管中，每组设3个重复，灭菌冷却后，接种方法同1.3，接种后于24℃恒温水平培养，接种培养10天记录菌丝生长情况。

1.8 不同PH对菌丝生长的影响

供试培养基（同1.1）灭菌后，在超净工作台上趁热用无菌移液管滴加1N HCl或1N NaOH溶液,调整培养基pH至5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5和9.0共9个梯度,每个梯度设5个重复，接入供试菌种，接种方法同1.3，接种后的平板于25℃恒温培养。分别于接种后11d、12d测量菌落直径,计算菌丝平均每天生长速度，记录菌丝生长状态。

1.9 数据分析

    实验数据采用SPSS 21.0分析软件，对所得数据用Duncan进行统计分析（P＜0.05）。

1. 结果与分析

1. 菌丝显微观察结果

   显微观察发现大肥蘑菇菌丝在培养基上程树枝状向外蔓延，细胞比较狭长，菌丝无横隔，无典型的锁装联合（图1）。

    

    

   

    

   图1 大肥蘑菇的菌丝显微照片（显微放大400倍）

2. 不同碳源对菌丝生长的影响

由表1可知，在不同碳源培养下，大肥蘑菇的菌丝生长势、菌丝疏密度、菌丝颜色和生长速度不同，在麦芽糖碳源培养下，菌丝浓白，菌丝生长速度最快，菌丝生长势和疏密度也最好，葡萄糖和蔗糖的碳源培养下菌丝生长速度差异不明显，此两种碳源与麦芽糖碳源相比差异显著，菌丝生长势也不及麦芽糖碳源，因此麦芽糖为该菌株的最适碳源。

表1  不同碳源对菌丝生长的影响

数据为5次重复的平均值±标准误差，不同小写字母表示各组差异显著水平P＜0.05；“+” 表示菌丝生长势弱，“++”表示菌丝生长势一般，“+++”表示菌丝生长势强；“*”表示菌丝体生长不浓密，“**”表示菌丝体浓密度一般，“***”表示菌丝体生长浓密。

1. 不同氮源对菌丝生长的影响

由表2可知，不同氮源培养条件下该菌株的菌丝生长势、菌丝疏密度、菌丝体颜色和生长速度不同，麸皮氮源条件下菌丝生长势、菌丝疏密度最好，菌丝生长速度最快，硫酸铵氮源条件下菌丝停止生长，蛋白胨和玉米粉氮源条件下菌丝生长速度差异不明显，酵母膏和尿素氮源条件下菌丝生长速度差异也不明显，所以麸皮为该菌株的最适氮源。

表2  不同氮源对菌丝生长的影响

注：同表1

1. 不同无机盐对菌丝生长的影响

由表3可知，硫酸钙为无机盐条件下该菌株的菌丝浓白，菌丝生长势、菌丝疏密度最好，菌丝生长速度最快；硫酸镁、硫酸锌无机盐条件下菌丝生长速度差异不明显，但与硫酸钙相比差异显著；磷酸二氢钾和硫酸亚铁无机盐条件下菌丝生长速度差异也不明显，菌丝生长势最弱，所以硫酸钙为该菌株的最适无机盐。

表3 不同无机盐对菌丝生长的影响

注：同表1

1. 温度对菌丝生长的影响

由表4可知，该菌株在不同温度培养条件下，菌丝生长势、菌落形态、菌丝体颜色和菌丝生长速度不同，该菌株在20℃菌丝生长势最好，培养11 d菌落直径最大，菌落浓白、健壮而圆整，25℃条件下菌丝虽然生长势也最好，但菌落不圆整，培养11 d菌落直径与20℃差异明显；该菌株在5℃菌丝长势弱，生长极慢；在35℃菌丝长势弱，菌丝停止生长，接种块退化变成黄褐色，综上所述，20℃为该菌株的最适生长温度。

表4 不同温度对菌丝生长的影响

注：同表1

1. 含水量对菌丝生长的影响

由表5可知，含水量影响该菌株的菌丝生长势、菌丝生长速度和颜色，含水量为65%时菌丝生长势最好，菌丝浓白，10d菌丝生长的长度最长，含水量为60%时，菌丝生长势虽好，但10d菌丝生长的长度与含水量为65%的相比差异显著；含水量为55%和70%时差异不显著；含水量为45%、50%和75%时，差异也不显著；含水量为80%时，菌丝灰白，菌丝生长缓慢，综上所述，培养基含水量为65%时最适合该菌株。

表5  含水量对大肥蘑菇菌丝生长的影响

数据为5次重复的平均值±标准误差，其它注同表1

1. PH对菌丝生长的影响

由表6可知，培养基的酸碱度影响该菌株的菌丝生长势、颜色、疏密度和生长速度，当PH为6.5和7.0时，菌丝生长势好，菌丝洁白，但两者的菌丝生长速度差异显著，PH为6.5时，菌丝的疏密度也更好；PH为8时，菌丝生长速度介于PH7.5和PH8.5之间；菌丝在PH5.0、PH5.5条件下均停止生长，因此该菌株的最适PH为6.5 。

表6  PH对菌丝生长的影响

注：同表1

3 小结

试验分析了该株大肥蘑菇菌丝的形态特征，最适碳源、氮源、无机盐、温度、PH和含水量，为该菌株的驯化栽培提供了理论依据，但该菌株的适宜栽培配方和出菇环境依然未知，这些还有待进一步研究，为开发利用该菌株奠定基础。

参考文献

[1] 卯晓岚.中国蕈菌[M].北京：科学出版社，2009:228-233.

[2] 杨琴,杜双田,张桂香.环境因素对大肥蘑菇菌丝生长的影响[J].西北农林科技大学学报,2018，46(3)：128-133．